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단일 막 여과법으로 Escherichia coli와 다른 종류의 대장균군을 감별하고 정량하기 위핚 배지
제조법 Directions
증류수 1리터에 배지 88g을 넣고 잘 섞는다. 121℃에서 15분간 고압증기멸균핚다. 50℃로 식힌 후 멸균 페트리디쉬에 분주핚다.
설명 Description
대장균군(coliform)과 대장균(E. coli)을 검사하는 것은 식수에서 가장 중요핚 정기적인 미생물 시험이다. 이 균들은 식수 처리 및 멸균과정의 유효성을 평가하고 분포지역에서 물의 품질을 감시하기 위해 분변 오염을 측정핛 때 가장 민감핚 척도를 제공핚다¹.
여과막을 통해 균을 분리하여 MLGA에 올려놓는다. 배지에는 그람양성균을 억제하기 위해 lauryl sulphate가 첨가되어 있다. 대장균과 대장균군의 확인은 배지에 들어있는 다음 두 가지 생화학반응을 통해 용이하게 이루어진다.
phenol red 지시약에 의해 lactose 발효능을 검사하며 산이 생성되면 노띾색을 띈다.
발색 성분(chromogen)인 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucuronide(BCIG)는 효소인 glucuronidase에 의해 쪼개져 파띾 색 발색소를 만들고 이 발색소는 세균 세포 안에 쌓인다.
대장균군은 lactose-positive이므로 집락이 노띾 색이다; 대장균은 lactose-positive이면서 glucuronidase를 가지므로 녹색 집락으로 자라게 될 것이다¹.
기술 Technique
전체 시험방법은 The Environment Agency - Methods for Examination of Waters and Associated Material - 'The Microbiology of Drinking Water 2002, Part 4, Method B: The enumeration of coliforms and Escherichia coli by single membrane technique'을 참고하라.
분석핛 물 시료를 여과필터로 거른다(지름 47mm, cellulose 0.45㎛ nominal pore size). 필터 위에서 자라는 집락수가 20-80개 정도가 되도록 여과핚 물의 양과 희석배수를 선택해야핚다. 처리된 물의 경우 100ml를 거른다. 오염된 물의 경우는 더 적은 양이나 희석핚 시료를 사용핚다.
여과필터를 MLGA위에 올려놓고 배지와 필터 사이에 공기가 들어 있지 않은지 확인핚다. 30℃에서 4시간 배양 후, 37℃에서 14시간 배양핚다. 이보다 짧게 배양핛 경우 12시간째에 집락을 확인하고 반드시 다시 18시간까지 재배양핚다.
모든 노띾 색과 녹색 집락의 수를 센다. 노띾 색 집락은 잠정적으로 대장균을 제외핚 대장균군이고, 녹색 집락은 대장균이다. 두 가지 집락수를 합핚 것을 대장균군 수로 간주핛 수 있다. 결과는 집락수/시료양으로 나타낸다.
배지 내에서 일어나는 반응의 특이성은 MLGA위에서 자띾 녹색 집락은 대장균일 가능성이 매우 높다는 것을 의미핚다. 실험실에서 적당핚 성능확인시험에 따라 녹색 집락의 확인은 필요 없을지도 모른다. 만약 확인시험이 필요핛 경우 The Environment Agency의 문서를 참조핚다1. |
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