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사용처
chocolate agar base, GC Medium Base, GC Agar Base와 GC II Agar Base는 Neisseria gonorrhoeae와 다른 까다로운 균을 분리하고 배양하는데 다양한 첨가제와 함께 사용된다.
용해제 Fluid B가 들어있는 Difco Supplement B, 용해제 Fluid VX가 들어있는 Difco Supplement VX와 용해액이 들어있는 BBL IsoVitaleX Enrichment는 특히, Neisseria gonorrhoeae와 Haemophilus influenzae와 같은 까다로운 균을 배양하기 위해 배지에 첨가되어 사용된다.
BBL Hemoglobin 제품은 균 배양 배지를 만드는데 사용된다.
Difco Antimicrobic CNV와 BBL VCN Inhibitor, VCNT Inhibitor, VCA Inhibitor 와 VCAT Inhibitor는 N.gonorrhoeae와 N.meningitidis를 배양하기 위한 선택배지에 사용되는 억제제가 들어있는 냉동 건조된 조제품이다.
요약 및 설명
1945년, Johnston은 48시간 보다는 24시간 안에 N.gonorrhoeae 집락을 성공적으로 만들 수 있는 배지에 대해 기술했다. 가속화된 성장율은 배지의 agar 성분이 감소된 것에 주로 기인했다. GC Medium Base는 감소된 agar 성분을 가지고 1947년에 소개되었다. 일부 임균 종의 성장율을 조사하는 동안, 성장 인자 glutamine과 cocarboxylase가 들어간 배지가 회복력을 향상시킨다는 것을 발견했다. 이 발견으로부터, Supplement B, yeast 농축물이 개발되었다. 12가지 다른 배지에 대한 비교연구에서, GC Medium Base, Hemoblobin과 Supplement B로 만든 강화된 chocolate agar가 N. gonorrhoeae 분리에 대한 우수성이 판명되었다. Difco VX Supplement와 BBL IsoVitaleX Enrichment는 yeast 농축물 첨가제를 대체하기 위해서 개발된 화학적으로 정의된 첨가제이다.
원재료의 조심스러운선택과 전-시험을 통해서, BBL GC II Agar Base는 GC agar base에서 이룬것보다 우수한 chocolate agar base로써 제공하기 위해 개발되었다. 대부분의 N.gonorrhoeae 종과 함께, 주요 분리균에서 육안으로 보이는 성장물이 18-24시간 배양 후에 보인다. GC II Agar Base는 병원성 Neisseria의 선택 분리를 위한 BBL 브랜드의 Chocolate II Agar 완제배지와 BBL chocolate agar에 기초한 배지Thayer-Martin, Modified Thayer-Martin, Martin-Lewis와 GC-Lect agar)에 사용된다.
Difco Supplement B는 까다로운 영양 요구성을 갖는 세균의 성장을 위한 배지 첨가제로 사용하기 위한 yeast 농축물이다. Christensen과 Schoenlein에 의해 기술된 chocolate agar를 만드는데 사용할 것을 추천한다.
Difco Supplement VX와 BBL IsoVitaleX Enrichment는 냉동 건조된 농축물이다. 이들 첨가제는 병원성 Neisseria의 분리를 위한 GC Agar media, Proteose No.3 Agar와 선택성 평판배지를 강화하는데 추천된다.
헤모글로빈, 소 혈액 중에 고압증기멸균을 할 수 있는 조제품은 Haemophilus 종에 의해 요구되는 hemin을 제공하고 Neisseria 종의 성장을 강화한다.
1964년, Thayer와 Martin은 추가된 Hemoglobin과 Supplement B가 들어간 GC Agar에 항생제 polymyxin B와 ristocetin을 병합해서 선택 배지를 만들었다. Thayer와 Martin은 2가지 원래 항생제를 새로운 미생물 용액 colistin, vancomycin과 nystatin(CNV/VCN)으로 대체해서 이 배지를 더 향상시켰다. 1971년, Martin과 Lester는 조성에 추가적인 항생제, Trimethoprim lactate(T)를 병합해서(VCNT) 새로운 Thayer-Martin medium 으로 향상시켰다. 이 향상된 배지는 Modified Thayer-Martin(MTM) Medium으로 불린다. CNV/VCN과 VCNT는 Thayer-Martin과 Modified Thayer-Martin agar, 각각을 만드는데 사용된다.
Martin과 Lewis는 그람 양성균을 더 크게 억제하기 위해서 vancomycin 농도를 3.0㎍/mL에서 4.0㎍/mL로 증가시키고 효모를 더 억제하기 위해서 nystatin을 anisomycin(VCA/VCAT)로 대체해서 MTM의 선택성을 더 향상시켰다; 이것은 Martin-Lewis(ML) Agar Medium으로 알려져 있다. Transgrow Medium 병과 Gono-Pak과 JEMBEC 플레이트는 이들 조성을 병합할 수 있는 chocolate agar에 기초한 수송배지 시스템이다.
분말제품에서 배지를 만드는 방법
Thayer-Martin Agar
1. 증류수 100mL에 GC base medium 7.2g을 녹인다. 완전히 혼합한다.
2. 수시로 저어주면서 가열하고 분말을 완전히 녹이기 위해서 1분간 끓인다.
3. 121℃, 15분간 고압증기멸균한다. 45-50℃까지 식힌다.
4. 무균적으로 100mL Hemoglobin 용액 2%를 첨가한다.
5. 2mL Supplement B 혹은 Supplement VX 혹은 IsoVitaleX Enrichment를 첨가한다.
6. 무균적으로 녹인 2mL Antimicrobic CNV 혹은 VCN 억제제를 배지에 넣는다.
7. 살균한 페트리 디시에 접종한다.
8. 신뢰할 수 있고, 전형적인 대조 배양물을 사용해서 최종 제품 샘플의 성능을 시험한다. |
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