'유산균'의 배양을 위한 MRS Broth의 고체형

사용방법
증류수 1L에 62g을 녹인다. 배지를 완전히 용해시키기 위해서 끓인다. 시험관, 병 혹은 플라스크에 분주하고 121°C, 15분간 고압증기멸균한다.

설명
MRS 조성은 다양한 제품(tomato juice)을 대체하기 위해서 그리고 동시에 일반적으로 lactobacilli , 심지어 기존배지에서 빈약한 성장을 보인 다른 종, 의 좋은 성장을 지지하는 배지로 제공되기 위해서 de Man, Rogosa 와 Sharpe에 의해 개발되었다. MRS medium은 Briggs의 tomato juice medium과 de Man의 meat extract tomato juice medium 보다 우수하다. 모든 종의 lactobacilli, 특히 Lactobacillus brevis 와 Lactobacillus fermenti 의 어렵고 느리게 성장하는 종의 성장을 더 풍요롭게 한다.

MRS Agar 와 Broth는 다음 속의 균을 포함해서 '유산균'의 성장을 고무시키기 위해서 고안되었다: Lactobacillus, Streptococcus, Pediococcus 와 Leuconostoc. 모든 이들 종은 상당한 량의 유산을 생산할 수 있다. 이들은 그람 양성, 카탈라아제와 옥시다아제 음성이고 영양 요구성에서 까다롭다. 미호기성 조건에서 성장이 강화된다. 일반적으로 '유산균'은 지연된 성장과 다른 균보다 더 작은 집락 크기가 보인다. 이들은 특히 만일 2-4일의 배양이 필요하다면, 비선택성 배지에서 과잉성장 할 것이다.

MRS medium은 lactobacilli를 위해 선택적이지만  leuconostocs 와 pediococci 중 약간의 성장이 일어날 수 있다. 선택성은 pH 조정으로 바뀔 수 있다. Lactobacilli는 이 범위에서 최고의 성장을 하는 pediococci 와 leuconostocs와 함께 연쇄상구균(pH 5.0-6.5)보다 더 낮은 pH에 내성이 있을 것이다. 경쟁 세균총 중 주요 그룹에 대한 억제제로 thallous acetate, sodium acetate, sorbic acid, acetic acid, sodium nitrite, cycloheximide 와 polymyxin이 들어간다. 이들 물질은 다양한 농도와 조합으로 사용될 수 있지만 불가피하게 찾는 균에 대한 선택성과 생산성 사이에서 타협점을 찾아야만 한다. sorbic acid과 들어간 MRS Agar에 대해 기술되고 있다.  이것은 pH를 5.7까지 감소되고  0.14% sorbic acid가 첨가된(0.2% potassium sorbate와 동일하게) MRS medium이다.  Lactobacillus acidophilus 와 Bifidobacterium 종의 선택적 계수를 위한 배지에 대한 평가에서 MRS Agar의 기본 조성에 대해 최소한의 조정으로 요거트에 있는 다른 유산균의 존재시 Lactobacillus acidophilus 와 Bifidobacterium spp.의 성분을 결정하는 것에 대한 이것의 성능을 최적화 할 수 있다는 것을 보여주었다.

Lactobacilli는 미호기성이고 일반적으로 고체 배지에서 호기 배양을 위해 layer plates를 필요로 한다. 가라앉은 집락 혹은 표면 집락은 빽빽하거나 깃털같고 작고, 불투명하고 흰색이다.

기술
1. lactobacilli 를 조사하기 위한 제품은 액체에 불리거나 1/4강도의 링거액과 같은 희석액으로 희석하고 추가적인 희석은 MRS Broth로 한다.
2. 1mL 부피로 희석된 샘플은 살균한 페트리디쉬에 넣고 녹인 MRS Agar (45°C)를 디쉬에 붓고 철저히 혼합한다. 
3. 이 배지가 완성되었을 때, 다른 층의 접종되지 않은 MRS Agar를 중층 플레이트를 만들기 위해서 표면에 붓는다.
4. 플레이트를 아래 기술된것처럼 배양한다. 배양하는 동안 플레이트가 마르는 것은 표면에서 선택제제를 농축시키고 배지를 억제성 있게 만들기 때문에 배지 위 대기 중에 충분한 습기가 존재하는 것이 중요하다. 이산화탄소의 존재는 성장을 자극하므로 플레이트는 5% CO₂ 대기 중에서 배양되어야만 한다. 

배양 방법

42°C 호열성:	2 일
35°C 중온성:	2 일
30°C + 22°C 중온성-저온성	2+1 일
25°C 저온성:	3 일

배양은 혐기성 혹은 미호기성 조건하에서 수행한다.
잠정적으로 Lactobacillus 집락을 동정하기 위해서, agar 배지에서 분리된 집락을 선택한다. 각각을 따서 개별적으로 MRS Broth (CM0359)에 푼다. 이 액체배지의 장점은 원래 선택 배지에서 휴지 상태로 놓여 있는 다른 세균들에게,  비선택성 배지에서 생길 수 있는, 증식할 기회를 주지 않는 다는 것이다.  MRS Agar에서 사용된 것과 비슷한 온도와 시간에서 이 액체배지를 배양한다; 그런 다음 현미경으로 조사하고 일련의 종에 대한 확정과 동정을 위해서 MRS Agar에 추가 계대배양을 한다.