사용처
Biotin Assay Medium은 세균 분석법에 의해 biotin 농도를 결정하는데 사용된다.

요약 및 설명
Vitamin assay media는 비타민을 세균학적으로 분석하는데 사용하기 위해 만든다. 3가지 형태의 배지가 이 목적에 사용된다:
1. 보존용 배지 : 시험균의 생존력과 감수성을 보호하기 위한 보관용 배양물을 운반하기 위한 것.
2. 접종용 배지 : 즉시 사용하기 위한 시험 배양물을 알맞은 상태로 하기 위한 것.
3. 분석용 배지 : 시험 중이 비타민을 정량하기 위한 것. 결정해야 하는 단일 필수 비타민을 제외하고 시험 균의 최적 성장을 위해 필요한 모든 요소가 포함된다. 

Biotin Assay Medium은 시험균으로 Lactobacillus plantarum ATCC8014를 사용해서 biotin에 대한 세균학적 분석에 사용하기 위해 만들어진다.

시험원리
Biotin Assay Medium은 L.plantarum ATCC 8014의 배양을 위한 다른 모든 영양분과 필수 비타민이 들어간 biotin이 없는 건조 배지이다. 특이적으로 증가하는 농도로 biotin standard를 첨가하는 것은 적정 혹은 탁도로 측정될 수 있는 이 균에 의한 성장 반응을 제공한다. 

주의
세균분석과정에서 배지나 유리제품의 오염을 피하도록 아주 주의를 기울여야만 한다.  극히 적은 량의 외부 물질이라도 잘못된 결과를 제공하기에 충분할 수 있다. 양심적으로 세제나 다른 화학물질이 없는 깨끗한 유리제품을 사용해야만 한다. 유리제품은 존재할 수 있는 임의의 유기 잔여물을 태워버리기 위해서 적어도 1시간동안 250℃에서 가열해야만 한다. 이 분석과정 전체에 걸쳐서 살균이 유지되도록 하고 냉각 조건이 균일화하도록 주의를 기울인다.

분말제품으로부터 배지 만드는 방법
1. 증류수 100mL에 분말 7.5g을 녹인다.
2. 수시로 저어주면서 가열하고 분말을 완전히 용해시키기 위해서 2-3분간 끓인다.
3. 침전물을 골고루 분산시키면서, 시험관에 5mL 단위로 분주한다.
4. standard나 시험 샘플을 첨가한다.
5. 증류수로 시험관 부피 10mL까지 조정한다.
6. 121℃, 5분간 고압증기멸균한다.

절차
Stock Cultures
시험균, L.plantarum ATCC8014의 보관용 배양물은 Lactobacilli Agar AOAC에 질러서 접종함으로써 만들어진다. 35-37℃에서 16-24시간 배양 후에, 시험관은 냉장고에 보관된다. 매주 옮겨준다.
 
Inoculum
분석을 위한 접종물은 L.plantarum ATCC 8014의 보관용 배양물을 0.5ng biotin이 첨가된 10mL의 1배 강도 Biotin Assay Medium에 계대배양함으로써 만들어진다. 35-37℃에서 16-24시간 배양한 후에, 무균 조건하에서 세포를 원심분리하고 상층액을 가만히 따른다. 세포를 살균된 10mL의 0.85% saline으로 3번 씻는다. 세번째 세척 후, 세포를 살균한 10mL의 0.85% saline에 다시 현탁시키고 최종적으로 살균한 0.85% saline으로 1:100 희석한다. 이 현탁액 1방울이 각 10mL 분석용 시험관에 접종되어 사용된다. 

Standard Curve
표준 곡선은 분석이 진행되는 매번 만드는 것이 필수적이다. 고압증기멸균과 배양 조건이 표준 곡선을 읽는데 영향을 미칠 수 있어서 항상 똑같이 되지는 않는다. 표준곡선은 분석용 시험관(10mL)당 0.0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.8 과 1ng의 수준으로 biotin을 사용해서 얻는다. 

표준곡선을 만들기 위해 필요한 biotin의 농도는 d-Biotin 0.1g을 녹이거나 25% 알코올 용액 1000mL에 동량을 녹여서 만들 수 있다(100㎍/mL). 증류수 98mL에 2mL를 첨가해서 보관용 용액을 희석한다. 이 용액은 mL당 2ng의 biotin 용액을 제공해서, 증류수 999mL에 1mL를 첨가해서 희석된다. 이 용액은 mL당 0.2ng의 biotin 최종 용액을 제공해서, 증류수 90mL에 10mL를 첨가함으로써 더 희석된다. 이 최종 용액 0.0, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4와 5mL를 사용한다. 매일 신선한 stock solution을 만든다.

Biotin Assay Medium은 탁도와 적정 분석 2가지 모두에 사용될 수 있다. 판독하기 전에, 시험관은 성장을 정지시키기 위해서 15-30분간 냉장처리된다. 탁도 판독은 35-37℃에서 16-20시간 후에 만들어져야만 한다. 적정 결정은 35-37℃에서 72시간 배양 후에 만들어진다. Biotin Assay Medium을 사용하는 가장 효과적인 분석 범위는 0.1ng과 1ng biotin 사이라고 밝혀졌다.